【RNAi（RNA干渉）】 1997年にアメリカのカーネギー研究所が線虫の細胞を用いた実験で、長鎖の二本鎖RNAがgene silencingを起すことを見出し、RNA干渉（RNAi）と名付け報告しました。しかし、長鎖の二本鎖RNAは哺乳動物細胞中では非特異的な免疫応答を惹起す…

Polymerase Chain Reactionの略。 ２本のプライマ−の間のＤＮＡ分子を数十万〜百万倍に増幅する技術。 バイオ研究を知らない方も読まれていると思いますので、いきなり説明から入りましたが、 社会人になってから、どうも実験関係の話を全くしていないので、…

ELISPOT 細胞数をちょっと変えてやってみることにしました。 徹夜になりそうです。 修士論文要旨 仮提出しました。ほぼ一日中やってました。 かなり焦ってました。ほっと一息です。 ◇ 一言 ◇

細胞の世話 来週の実験に使えるようにエヌちゃんのお世話をしました。 昨日の実験に使いたかったから増やしたのに、 培地がもったいないと思いつつ捨てました。 培地の減りが最近早く、培地も作りました。 ◇ 一言 ◇

ELISPOTデータ整理 本当は今日やりたかった実験があったのですが、 試薬が足りないため、断念しました。 ◇ 一言 ◇

ELISPOTデータ整理 昨日出た結果を顕微鏡で確認しました。 というか、やっぱり基質が足りなかったので、失敗です。 ということで注文しました。 というか、今週もう一度使いたいのに、 間に合わないでしょうか。。。 それと、試薬がいろいろ足りなくなったの…

細胞の世話 選択培地と増殖培地で飼っていたエヌちゃんを 増殖培地に交換しました。 来週からのためにエヌちゃんを解凍しました。 ◇ 一言 ◇

細胞の世話 選択培地で飼っていたエヌちゃんを凍結しました。 選択培地がなくなってしまったので、作らないと行けません。 選択培地は作るのが、少し面倒です。 ◇ 一言 ◇

ELISPOT 一昨日からの続きです。 もうすぐ終わりそうです。 ◇ 一言 ◇

明日の準備 解剖器具や試薬をオートクレーブをしました。 ◇ 一言 ◇

MLR 前回と同じように、やりました。 今日は全採血は前回よりは取れました。 細胞の世話 エヌちゃんたちの培地交換しました。 選択培地で飼っている方は凍結しました。 また、次の実験に備え、エヌちゃんを起こしました。

ELISPOT 昨日の続きでした。 また後でカウントします。

ELISPOT（途中まで） 二種類のマウス由来のCTLの活性の違いについての再現性を取ります。 また、精製した抗体で系が動くか確認し、 標的細胞の数の条件検討も行います。 ◇ 一言 ◇

データ整理 明日のELIPOTに向けて、使う抗体に関するデータを 整理して計画を立てました。 ◇ 一言 ◇

SDS-PAGE 先週行った抗体精製の確認のためのSDS-PAGEですが、 やり直しで２回目、またも失敗、 続けて３回目、成功しました。 試薬を間違えて、抵抗が大きくなってしまったことが原因でした。 SDS-PAGEは作業としてはたいしたことはないのですが、 時間がか…

MLR 昨日精製した抗体から、系への応用のために どんどんやらねばなりません。 今日は全採血かなり少ししか取れませんでした。 細胞の世話 エヌちゃんたちは、順調に増えています。 10mlのフラスコにスケールアップしました。

ELISA 昨日の続きで、精製した抗体量や活性を調べました。 三種類のprotocolを同時進行すると、結構大変です。 samplingに予想以上に時間がかかったような気がします。 SDS-PAGE 精製した抗体が精製されているかどうかの確認です。 友人のsampleも一つ一緒に…

ELISA（途中まで） 昨日精製した抗体が使えるかを確認します。 精製抗体はまだ透析中で、もう一度buffer交換しました。 ノート整理 だんだんたまって来た*1ので、ノート整理しました。 別のパソコンに入っているデータをMy PCに移しました。 ４回生のお手伝…

Protein Gによる精製 アフィニティ精製をしようと考えていたのですが、 カラムを作るのに注文するタンパク質がもったいないとのことで、 Protein Gを使って精製しました。 初めから分かっていたら、硫安分画する必要はなかったんですが。 細胞の世話 昨日起…

discussion 三週間ぶりのdiscussionということで、データ整理の続きをして 簡単なプレゼン資料を作り、準備しました。 discussionは、久しぶりに気持ち良く終われました。 しかし、researchセミナーから全部終わるまで二時間半は長いです。 細胞の世話 ちょ…

データ整理 明後日dicussionなので、やらねばならないのです。 ４回生のお手伝い 25日に免疫したマウス*1で、膝下リンパ節を取る練習です。 とりあえず、初めてなので。 ◇ 一言 ◇ *1:もらいもので、これが３次免疫になります。

ジャーナル発表準備 昨日から、引き続きしました。 シートの作成に手を付けるのが遅れたせいで、ピンチでした。 前回の教訓から、Introから作ったのは、良かったのですが。

ジャーナル発表の準備 明日、発表なんですが、今朝選びました。 間に合うでしょうか。

ELISPOT Washの仕方が悪いのかと思い、 ８連の連続分注器につけているチップの先を全部切って、 思いっきり丁寧にやってみました。 今日1日でcortingから終わるまでやるので、徹夜しなければ終わりません。 ◇ 一言 ◇

ELISPOTデータ整理 顕微鏡でいつも一つ一つカウントしてるんですが、 なんだかだんだんデータがたまって行く傾向があります。 細胞の世話 いつもの世話ですが、そろそろ次を用意しないといけません。 ４回生のお手伝い たいしたことじゃありませんが、膝下リ…

ELISPOTのデータ整理 さて、結果はどうでしょうか。 ◇ 一言 ◇

ELISPOT 昨日から続きです。 ◇ 一言 ◇

ELISPOT いつものことだが、気合いで今度こそよいデータが出ると良いな。 プレートを二種類に播いてみたので、どうかと見てみたら、 いつものプレートの方が、底面積が広くていいようです。 回収率がどうなのか、気になるところです。 細胞の世話 微妙に増え…

MLR 今日は三種類のマウスをさばきました。 全採血は、少し少なめですが、きちんと取れました。 ジャーナル開始にぎりぎりでした。 ELISPOT準備 cortingの遠心を30secに短くしました。 その後の遠心もすべて30secに変えてやることでプレートの乾きを防ぎ、 w…

ELISAデータ整理 なかなか興味深いデータです。 やはりアフィニティ精製をすることになりそうなので、必要なものを注文しました。 細胞の世話 明後日使うから、継代しました。 月曜日に調子を調べたので、いい子だけ15mlのフラスコにスケールアップしました。